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當前位置:首頁產品中心產品試劑盒BrainBits星形膠質細胞全腦培養(yǎng)試劑盒

BrainBits星形膠質細胞全腦培養(yǎng)試劑盒
產品簡介:

BrainBits星形膠質細胞全腦培養(yǎng)試劑盒代理——北京百奧創(chuàng)新科技有限公司,現貨供應BrainBits試劑盒,更多BrainBits品牌產品介紹,歡迎咨詢!

產品型號:

更新時間:2025-05-13

廠商性質:代理商

訪問量:1199

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產品介紹

一、BrainBits星形膠質細胞全腦培養(yǎng)試劑盒內容

該試劑盒內含:1 E18小鼠全腦、12mL NbAstro6.2mg木瓜蛋白酶、5mL HE-Ca 1個帶橡膠球的火拋光移液、1PDL涂層蓋板

二、BrainBits星形膠質細胞全腦培養(yǎng)試劑盒產品簡介

該試劑盒包含從新鮮組織開始培養(yǎng)所需的一切。E18組織用2mlB27THRYVE胚胎儲存介質運送。立即使用組織以獲得最高的細胞產量,但組織可在4-8°C下保存一周。這個試劑盒是完mei的研究人員剛剛開始或為那些誰想要的可靠性。非常適合課堂教育,為下一代研究人員提供實踐方法。

三、產品操作

(1)細胞分散(無菌操作箱中的室溫)

A、 2 毫升移液管小心地將組織轉移至木瓜蛋白酶中,盡量減少培養(yǎng)基的轉移。將 THRYVE 胚胎完quan培養(yǎng)基轉移至一個新的無菌 15 毫升管中,以備第三步使用。

B、將組織和木瓜蛋白酶在30下孵育 10 分鐘。每 2 分鐘輕輕攪拌一次,或者使用加熱振蕩板,溫度為30,轉速為 150 /分鐘。

C、 2 毫升移液管從木瓜蛋白酶中取出含有少量培養(yǎng)基的組織,并返回步驟 A中的 THRYVE 胚胎完quan培養(yǎng)基中。

D、使用涂有硅油的巴斯德移液管,研磨組織不超過 10 次,或分散 90%的組織,避免產生氣泡。

E、讓未分散的顆粒靜置 1 分鐘。可選:向細胞懸液中加入 400 微升 1 毫克/毫升的 DNase I 溶液,并在室溫下孵育 15 分鐘,每 5 分鐘輕輕攪拌或搖晃試管。

F、將含有分散細胞的細胞懸液轉移到無菌的 15 毫升管中。留下約 50 微升含有碎片的 THRYVE 胚胎完quan培養(yǎng)基。可選:通過 70 微米的細胞過濾器過濾細胞溶液。

G、 1100 /分(200×G)離心 1 分鐘。棄去上清液,留下約 50 微升含有沉淀物的 THRYVE 胚胎完quan培養(yǎng)基。

H、分散細胞團(用手指或試管輕彈管底),然后將細胞團重新懸浮于 1 毫升的星形膠質細胞培養(yǎng)基(NbAstro™)中。

I、 20 微升細胞溶液分裝到含有 80 微升臺盼藍(1:5 稀釋)的 0.5 毫升管中。

J、使用血細胞ji數器(計算細胞/毫升)或采用當前的實驗室程序來計數細胞。 2細胞培養(yǎng)(無菌室中的室溫)

A、 0.2 毫升/平方厘米的 NbAstro™ 稀釋細胞,并以 7500 個細胞/平方厘米或期望的濃度進行鋪板。注意:以更高的密度鋪板會導致神經元和星形膠質細胞的混合。

B、孵化時間37 5%的二氧化碳29%的氧氣295%的濕度(或環(huán)境濕度O2 )

C、  3 - 4 天用新鮮的、37℃、二氧化碳平衡的 NbAstro 更換一半的培養(yǎng)基。

D、1.5 2 周后,星形膠質細胞將有 90%融合,準備收獲或傳代。

E、若要轉移到神經元培養(yǎng)物中:提前 24 小時,將一半的培養(yǎng)基更換為 Neurobasal®/B27®/GlutaMAX™NbActiv1™)。

F、對于擴增:用 0.25%胰蛋bai酶在 THRYVE 胚胎培養(yǎng)基中收獲細胞,(37 5 分鐘)。

G、若要抑制胰dan白酶,請使用dan蛋白酶抑制劑或血清。

3活力測定:

A 37 平衡yan溶液(0.2 毫升/平方厘米底物)沖洗兩次。

B 15mg/ml 熒光素二乙酸酯的丙酮儲備液和 4.6mg/ml 碘化丙啶的水溶液儲備液中制備染色液,將每種溶液稀釋 15 微升至 1.5 毫升的 HBSS 中(1:100 稀釋)。

C將步驟 B 中的 20 微升染料混合物添加到步驟A中添加的每 0.2 毫升的 HBSS 中(1:10 稀釋)。

D 1 分鐘后,使用適合熒光素熒光的藍色激發(fā)來計數活細胞(綠色細胞)。使用綠色激發(fā)來計數碘化丙啶熒光(小紅色細胞核)的死細胞。

E活力 =(綠色細胞/單位面積)/(單位面積上鋪板的總細胞數) 或者存活率 = 綠色細胞/(綠色細胞 + 紅色細胞)

BrainBits星形膠質細胞全腦培養(yǎng)試劑盒



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