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細胞消化的注意事項有什么?

更新時間:2024-01-28點擊次數:975
  細胞培養(yǎng)中的消化傳代操作是指將細胞從當前的培養(yǎng)瓶、皿中分離出來,經過消化處理后,分散到新的培養(yǎng)瓶、皿中進行繼續(xù)培養(yǎng)。那么你知道細胞消化的注意事項有什么嗎?讓我們一起來看看吧!
  一、胰蛋白酶的選擇
  EDTA是一種螯合劑,可以與金屬離子結合。含有EDTA的胰蛋白酶除了具有胰蛋白酶的消化作用外,還具有螯合金屬離子的作用。在細胞培養(yǎng)中,含有EDTA的胰蛋白酶,通過螯合細胞表面的鈣離子,破壞細胞與細胞之間的黏附作用,從而使細胞分離出來。
  因此,如果需要進行細胞解離和分離操作,可以選擇含有EDTA的胰蛋白酶;如果只需要進行消化傳代操作,可以選擇不含EDTA的胰蛋白酶。
  二、消化時間的掌握
  消化時間的長短會影響細胞的生長和狀態(tài)。如果消化時間過長,可能會導致細胞死亡或者受損;如果消化時間過短,則可能會導致細胞未能完q分散,影響細胞的生長和分化。但細胞多長時間能被消化下來,并不完q取決于胰蛋白酶,還和消化的溫度、細胞的密度、以及消化環(huán)境有關。
  通常,37°C下進行消化可以縮短消化時間。我們的胰蛋白酶平時一般放在冰箱內,在消化操作之前,可以提前拿出。加入胰蛋白酶后,可以把培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱內進行消化,這樣可以有效縮短消化時間。另外,不應該在細胞密度太高時才想起來進行消化傳代。當密度太高時,細胞之間的黏連會加劇,此時同等的消化條件,會需要花費更多的時間進行消化,進一步提高了判斷消化進度的難度。比較合理的傳代密度應該在70-80%之間。
  三、其他注意事項
  在加入胰蛋白酶之前,通常會使用pbs進行潤洗,潤洗后,應該徹d扔棄瓶內的pbs后,再加入胰蛋白酶進行消化。
  加入胰蛋白酶的量應該是剛剛沒過整個培養(yǎng)瓶底部即可。
  在消化過程中,如果發(fā)現細胞解離太快,可以把培養(yǎng)瓶豎起來,讓瓶壁上殘留的消化液進行消化。
  更多有關細胞消化的注意事項,請聯系北京百奧創(chuàng)新科技有限公司。
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